高通量自动洗板机洗板时应注意的三个关键点
加入时间:2023-05-19 14:47:03 当前新闻点击率:686
标签:洗板机
优化ELISA的重点之一在于洗涤。洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号,从而增加分析的信噪比。高通量自动洗板机洗板人为因素少,速度快,条件恒定,但是使用高通量自动洗板机洗板时应注意以下三个关键点。
洗涤参数
主要的参数是洗涤量。高通量自动洗板机会分配洗涤液。如果你之前遭遇过高背景,那么不要犹豫,将洗涤量调为高,是比包被体积更高。太少的洗涤液会让一部分分析表面洗涤不到,从而明显增加背景。所有反应孔的洗涤量必须相同。
洗涤次数
影响洗涤效果的主要参数是洗涤循环的量。当然,洗涤次数越多,背景越低。然而,太多次的洗涤会降低信号强度,使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过,一般而言,包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板,必须优化洗涤次数。
控制洗涤量和洗涤次数的另一种方法是加入过量的洗涤液。一般来说,96孔板的每个孔能容纳330至460 μl。不过,有些高通量自动洗板机可设置程序,分配远远超出这个量的洗涤液,比如1 ml。它是如何做到的呢?其实很简单,就是在分液的同时打开吸液功能。换句话说,随着分液器分配更多的液体,抽吸器也将液体吸出。这种技术能增加洗涤量,但不会溢出到其他孔中。
抽吸
还有一些参数会影响洗涤步骤的效果。这些参数包括吸液高度和吸入位置,这两者都能调整,以降低背景(残留量)和差异。
残留液体中包含未结合的抗原或抗体,它们会增加背景信号。残留量越小,残留液体越少,转移到下一步的干扰液体也就越少。 吸液高度会明显影响残留量。如果洗涤吸头与反应孔底部的距离稍大,那就会让残留量急剧增加。反之,如果洗涤吸头压着反应孔底部,那么也会使吸液效率降低,残留量增加。
目前的高通量自动洗板机一般使用两种类型的洗头:刚性和浮动。浮动洗头中的吸头可在洗涤过程中自由上下移动,而刚性洗头则固定在适当的位置。使用刚性洗头的洗涤操作在优化起来更为复杂,因为需要非常仔细地调整吸液高度。如果实验室使用几种不同的板,那可能会很耗时。在使用浮动洗头时,吸头会降到反应孔的底部。调整高度就不是很重要,因此洗头会下降到底部。
抽吸的位置也对残留量有着重要影响。如果每个孔只使用一个抽吸点(这很常见,因为更快),那么抽吸的位置需要优化。位置取决于洗头的性状,但它几乎不在反应孔的中间,即使这是所有洗头常见的默认位置。一般来说,位置在孔中间与孔壁之间的某处。
反应孔的形状也会影响残留量。C形底(平底圆角)的微孔板一般会比那些平底尖角的微孔板残留量更低。 上一篇:
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